Визначення німесуліду в сироватці крові методом високоефективної рідинної хроматографії

Abstract

Розроблено простий та швидкий метод визначення німесуліду в плазмі крові. 0,2 мл сироватки крові підкислювали 0,02 мл 1 М соляної ислоти. До проби додавали внутрішній стандарт (індометацин) та 0,6 мл ацетонітрилу. Суміш струшували протягом 1 хв. Після завершення однофазної екстракції пробу центрифугували при 3000 об./хв протягом 30 хв. Надосадову рідину після фільтрування на фільтрі з розміром пор 0,45 мкм вводили в хроматографічну колонку (20 мкл). Колонку розміром 125x4 мм було заповнено сорбентом Hypersil BDS C18 з розміром гранул 5 мкм. Застосовано ізократичне елюювання зі складом мобільної фази – 50 % 0,03 М цитратного буфера (рН=3,1) і 50 % ацетонітрилу, швидкість елюювання – 600 мкл/хв, температура колонки – 20 °С. Детектування німесуліду проводили при довжині хвилі 240 нм. За цих мов час виходу німесуліду з колонки складав 5,9 хв, а час виходу внутрішнього стандарту (індометацин ) – 8,5 хв. У діапазоні концентрацій німесуліду в сироватці від 0,2 до 50 мг/мл зберігалась пропорційна залежність між площею хроматографічного піку та кількістю препарату в пробі.